一、流動相在色譜方法開發中的地位

直接影響分離效果

流動相的組成、比例、pH、離子強度、極性等參數會顯著影響樣品在色譜柱上的保留行為，決定了各組分的分離度、塔板數、分析時間和靈敏度。

（例：反相色譜中加水比例或有機溶劑種類的變化，常導致保留時間和分離度明顯變化。）

控制選擇性和專屬性

不同流動相條件會改變分析物之間的選擇性（selectivity），使方法能夠區別、分離結構類似的雜質或對映體。

影響方法重現性與穩定性

流動相的精確性和一致性，是方法穩健性的基礎。雜質、pH波動、流動相老化可能導致數據漂移。

決定檢測器兼容性和下游分析條件

如色譜純度分析、質譜聯用等，流動相需無干擾、低背景；有機溶劑比例會影響檢測響應。

與樣品適用性和方法通用性密切相關

優化流動相有時可實現用一個方法分析不同對象，提高效率和通用性。

二、流動相開發的核心內容

類型選擇：水/有機（如甲醇、乙腈等）；緩沖體系；

比例優化：梯度洗脫還是等度洗脫。

pH調節：對于帶酸堿基的分析物尤其重要（影響離子化和保留）。

緩沖鹽種類與濃度：對分離、峰形和系統兼容性有巨大影響。

添加劑：如離子對劑、表面活性劑、手性選擇劑等可以增強分離能力。

三、方法開發的步驟示例

屏選流動相體系（試甲醇/乙腈/緩沖液等）

梯度與等度比較，優化有機溶劑比例

pH探索，提高選擇性和峰型

添加劑添加實驗，提升分離復雜性和方法魯棒性

最后對穩定性、易用性、缺陷（如析出鹽等）再做驗證和優化

四、實際應用舉例

在藥物分析中，“色譜方法開發”初期幾乎都會多輪篩選流動相體系，采用DoE或單因素法優化流動相，以獲得最優分離度。

在“雜質分析”、“對映體拆分”、“復雜天然產物分離”等高難項目中，流動相的屏選與調整往往決定了方法的成敗。